Teicneolaíocht peptíde FRET

Aistriú fuinnimh athshondais fhluaraiseachta (FRET)

Is próiseas aistrithe fuinnimh neamh-radaíoch é aistriú fuinnimh athshondais fhluaraiseachta (FRET) ina n-aistrítear fuinneamh stáit sceitimíní an deontóra chuig an stát corraithe glacadóir trí idirghníomhú na lánúineacha leictreacha idirmhóilíneacha.Ní bhaineann an próiseas seo le fótóin agus mar sin tá sé neamh-radaíoch.Tá buntáistí ag baint leis an measúnú seo a bheith tapa, íogair agus simplí.

Féadfaidh an dath a úsáidtear sa mheasúnacht FRET a bheith comhionann.Ach i bhformhór na n-iarratas, úsáidtear ruaimeanna éagsúla i ndáiríre.Go hachomair, is éard atá i gceist le haistriú fuinneamh lonrúil athshondais ná péire dépholach a aistriú ón deontóir (lí 1) chuig an nglacadóir (lí 2) nuair a bhíonn an grúpa deontóirí ar bís.Go ginearálta, forluíonn speictream astaíochta an ghrúpa fluorophore Deontóra le speictream ionsú an ghrúpa Glacadóir.“Nuair a bhíonn an fad idir an dá fhluarafór oiriúnach (10 - 100 A), is féidir aistriú fuinnimh fluarafór ón deontóir go dtí an glacadóir a fheiceáil.”Braitheann an modh aistrithe fuinnimh ar struchtúr ceimiceach an ghabhdóra:

1. Déantar é a thiontú go creathadh móilíneach, is é sin, imíonn an solas lonrúil aistrithe fuinnimh.(Is múchadh éadrom é an gabhdóir)

2. Tá an t-astú níos déine ná an gabhdóir féin, agus mar thoradh air sin tá athaistriú sa speictream fluaraiseachta tánaisteach.”(Is astaírí lonrúla iad gabhdóirí).

Tá an grúpa deontóirí (EDANS) agus géine glacadóra (DABCYL) nasctha go haonfhoirmeach leis an tsubstráit nádúrtha de phróitéin VEID, agus nuair nach bhfuil an tsubstráit dícheangailte, is féidir le DABCYL EDANS a cheansú agus ansin a bheith do-bhraite le fluairín.Nuair a dhéantar próitéas VEID-1 a dhícheangal, ní dhéantar EDANS a dhícheangal le DABCYL a thuilleadh, agus is féidir luciferases EDANS a bhrath ina dhiaidh sin.Is féidir monatóireacht a dhéanamh ar infhaighteacht coscairí protease trí athruithe ar dhéine fhluaraiseachta EDANS.

Is uirlisí áisiúla iad peptídí FRET chun staidéar a dhéanamh ar neamhshonraíocht peptidase.Ós rud é gur féidir monatóireacht leanúnach a dhéanamh ar a phróiseas imoibrithe, soláthraíonn sé modh áisiúil chun gníomhaíocht einsím a bhrath.Soláthraíonn an sceal a tháirgtear tar éis hidrealú a dhéanamh ar bhannaí peiptíde ag an deontóir/glacadóir tomhas ar ghníomhaíocht einsíme ag tiúchain nanamhola.Nuair a bhíonn an peptide FRET slán, taispeánann sé go dtéann an splanc inmheánach ar iarraidh go tobann, ach nuair a bhriseann aon bhanna peptide os coinne an deontóra / an ghlacadóra, scaoileann sé splanc, is féidir a bhrath go leanúnach agus is féidir gníomhaíocht na heinsíme a chainníochtú ansin.