Mar ionstraim ardchruinneas, is féidir le HPLC roinnt fadhbanna beaga trioblóideacha a bheith mar thoradh go héasca mura n-oibrítear é ar an mbealach ceart le linn úsáide.Ceann de na fadhbanna is coitianta ná an fhadhb comhbhrú colún.Conas crómatagraf lochtach a réiteach go tapa.Tá córas HPLC comhdhéanta den chuid is mó de bhuidéal taiscumar, caidéal, injector, colún, seomra teocht colún, brathadóir agus córas próiseála sonraí.Maidir leis an gcóras iomlán, is iad na piléir, na caidéil agus na brathadóirí na príomhchodanna agus na príomhshuímh atá seans maith le fadhbanna.
Is í an eochair do bhrú colún an limistéar a dteastaíonn aird ghéar air nuair a bhíonn HPLC á úsáid.Tá dlúthbhaint ag cobhsaíocht brú colún le cruth buaic crómatagrafaíochta, éifeachtúlacht colún, éifeachtúlacht scaradh agus am coinneála.Ní chiallaíonn cobhsaíocht brú colún go bhfuil an luach brú cobhsaí ag luach cobhsaí, ach go bhfuil an raon luaineachta brú idir 345kPa nó 50PSI (a ligeann d'úsáid elution grádán nuair a bhíonn an brú colún cobhsaí agus ag athrú go mall).Is fadhb brú colún é brú ró-ard nó ró-íseal.
An ceann is mó seans maith le teipeanna agus réitigh HPLC
1, is é brú ard an fhadhb is coitianta maidir le húsáid HPLC.Ciallaíonn sé seo ardú tobann ar bhrú.Go ginearálta, tá na cúiseanna seo a leanas ann: (1) Go ginearálta, tá sé seo mar gheall ar bhac cainéal sreabhadh.Ag an bpointe seo, ba cheart dúinn é a scrúdú píosa beag.a.Gcéad dul síos, gearrtha amach ionraon an chaidéil folúis.Ag an bpointe seo, líonadh an feadán PEEK le leacht ionas go raibh an feadán PEEK níos lú ná an buidéal tuaslagóir féachaint an raibh an leacht ag sileadh ar thoil.Mura bhfuil an leacht ag sileadh nó ag sileadh go mall, tá an ceann scagaire tuaslagóir bac.Cóireáil: Soak in aigéad nítreach 30% ar feadh leathuaire agus sruthlaigh in uisce ultrapure.Má shreabhann an leacht go randamach, tá an ceann scagaire tuaslagóir gnáth agus á sheiceáil;b.Oscail an comhla Purge ionas nach dtéann an chéim soghluaiste tríd an gcolún, agus mura laghdaítear an brú go mór, cuirtear bac ar cheann bán an scagaire.Cóireáil: Baineadh whiteheads scagtha agus sonicated le isopropanol 10% ar feadh leathuaire.Ag glacadh leis go dtiteann an brú faoi bhun 100PSI, tá an ceann bán scagtha gnáth agus tá sé á sheiceáil;c.Bain deireadh scoir an cholúin, mura laghdaítear an brú, cuirtear bac ar an gcolún.Cóireáil: Más bac salainn maolánach é, sruthlaigh 95% go dtí go mbíonn an brú gnáth.Más ábhar níos caomhnaithe is cúis leis an mbacainn, ba cheart sreabhadh níos láidre ná an chéim shoghluaiste atá ann faoi láthair a úsáid chun dul i dtreo an ghnáthbhrú.Mura laghdaítear an brú glantacháin fadtéarmach de réir an mhodha thuas, is féidir a mheas go bhfuil inlet agus asraon an cholúin ceangailte leis an ionstraim ar a mhalairt, agus is féidir an colún a ghlanadh leis an gcéim soghluaiste.Ag an am seo, mura laghdaítear brú an cholúin fós, ní féidir ach pláta criathar iontrála an cholúin a athsholáthar, ach nuair nach bhfuil an oibríocht go maith, tá sé éasca a bheith mar thoradh ar an éifeacht colún a laghdú, mar sin déan iarracht níos lú a úsáid.I gcás fadhbanna deacra, féadfar smaoineamh ar athsholáthar colún.
(2) Socrú ráta sreafa mícheart: Is féidir an ráta sreafa ceart a athshocrú.
(3) Cóimheas sreabhadh mícheart: tá an t-innéacs slaodacht de chomhréireanna éagsúla sreafaí difriúil, agus tá brú an chórais comhfhreagrach den sreabhadh le slaodacht níos airde níos mó freisin.Más féidir, is féidir tuaslagóirí slaodachta níos ísle a athsholáthar nó a athshocrú agus a ullmhú.
(4) Brú an chórais náid sruth: coigeartaigh nialas an braiteora leibhéal leachtach.
2, tá an brú ró-íseal (1) de ghnáth de bharr sceitheadh córas.Cad atá le déanamh: Faigh gach nasc, go háirithe an comhéadan ag an dá cheann den cholún, agus déan an limistéar sceite níos doichte.Bain an post agus déan an scannán PTFE níos doichte nó a líneáil le fórsa cuí.
(2) Téann an gás isteach sa chaidéal, ach is gnách go mbíonn an brú éagobhsaí ag an am seo, ard agus íseal.Níos tromchúisí, ní bheidh an caidéal in ann an sreabhach a ionsú.Modh cóireála: oscail an comhla glantacháin agus glan ag ráta sreafa 3 ~ 5ml/min.Mura raibh, rinneadh boilgeoga aeir a asú ag an gcomhla sceite ag baint úsáide as feadán snáthaide tiomnaithe.
(3) Gan aon eis-sreabhadh céim soghluaiste: seiceáil an bhfuil céim soghluaiste sa bhuidéal taiscumar, cibé an bhfuil an doirteal tumtha sa chéim soghluaiste, agus an bhfuil an caidéal ag rith.
(4) Níl an comhla tagartha dúnta: déantar an comhla tagartha a dhúnadh tar éis luasmhoilliú.Téann sé síos go dtí 0.1 de ghnáth.~ 0.2mL / min tar éis an comhla tagartha a dhúnadh.
Achoimre:
Sa pháipéar seo, ní dhéantar anailís ach ar fhadhbanna coitianta i gcrómatagrafaíocht leachta.Ar ndóigh, inár n-iarratas praiticiúil, beidh muid ag teacht ar níos mó fadhbanna eile.I láimhseáil locht, ba cheart dúinn na prionsabail seo a leanas a leanúint: ach fachtóir amháin a athrú ag an am chun an gaol idir an fachtóir hipitéiseach agus an fhadhb a chinneadh;Go ginearálta, agus páirteanna á n-athsholáthar le haghaidh fabhtcheartaithe, ba cheart dúinn aird a thabhairt ar na codanna slána díchóimeála a chur ar ais i bhfeidhm chun dramhaíl a chosc;Is é an rud is tábhachtaí ná go n-éireoidh le láimhseáil locht a chruthú nós taifead maith.Mar fhocal scoir, nuair a bhíonn HPLC á úsáid, tá sé tábhachtach aird a thabhairt ar réamhchóireáil samplach agus ar oibriú agus cothabháil cheart an trealaimh.
Am postála: Meán Fómhair-18-2023