Cúlra
Is polaipeiptíd líneach é Melanotan I, ar a dtugtar Afamelanotide freisin, atá comhdhéanta de 13 aimínaigéid atá réidh le ról níos suntasaí a bheith aige i dtaighde cógaisíochta. Is iad na príomhainmneacha Béarla do Melanotan I ná Melanotan-1 agus Afamelanotide. Mar analóg sintéiseach de hormone α-melanocyte-spreagthach α-MSH), is féidir Melanotan I a úsáid chun cóireáil a dhéanamh ar neamhoird fóta-íogaireachta de bharr protoporphyria erythropoietic. Faoi láthair, tá an chuid is mó de tháirgí Melanotan I lipéadaithe le haghaidh úsáide taighde amháin agus níl siad ceaptha lena gcur i bhfeidhm ag an duine fós. I sintéis soladach-chéim traidisiúnta, bíonn tionchar suntasach ag an rogha roisín ar éifeachtúlacht cúplála agus ar íonacht deiridh an táirge.
Faisnéis bhunúsach
Ainm Sínis: Melanotan 1
Ainm Béarla: Melanotan-1
Uimhir Cuideachta: GT-A006
Uimhir CAS: 75921-69-6
Seicheamh: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Foirmle Mhóilíneach: C78H111N21O19
Meáchan Móilíneach: 1646.88
Modh ullmhúcháin
mé. Ullmhú Roisín Fmoc-Val-Amino
Céim 1:Meáigh 11.11g (5mmol) de roisín Ramage Amide AM agus céim ionadaithe de 0.45mmol/g agus cuir le himoibreoir soladach-phas é. Cuir DCM leis chun an roisín a at ar feadh 30 nóiméad, ansin taosc. Nigh trí huaire le DMF. Cuir tuaslagán DMF isteach ina bhfuil 20% pípiridín (v/v) agus imoibríonn ar feadh 5 nóiméad. Cuir tuaslagán DMF piperidine 20% eile leis agus imoibríonn ar feadh 10 nóiméad, agus nigh DMF amháin eatarthu. Tar éis don imoibriú a bheith críochnaithe, taosc agus nigh trí huaire le DMF.
Céim 2:Tuaslaig 5.09g de Fmoc-Val-OH, 2.02g de HOBT (1-hiodrocsaibenzotriazole), agus 2.32ml de DIC (N,N'-déisopropylcarbodiimide) i DMF ag 0°C. Tar éis díscaoileadh iomlán, cuir an meascán leis an gcolún imoibrithe agus imoibríonn sé ag teocht an tseomra ar feadh 1 uair an chloig. Monatóireacht a dhéanamh ar dhul chun cinn an imoibrithe ag baint úsáide as an tástáil ninhydrin, ag cinntiú toradh diúltach. Tar éis don imoibriú a bheith críochnaithe, nigh trí huaire le DMF chun roisín Fmoc-Val-aimín a fháil.
II. Ullmhú Peiptíd Roisín Lánchosanta de Melanotan I.
Céim 1:Cuir 20% piperidine i dtuaslagán DMF (cóimheas toirte) leis an Fmoc-Val-aminoresin thuas. Imoibríonn ar feadh 5 nóiméad, ansin cuir cuid eile de 20% piperidine i dtuaslagán DMF agus imoibríonn ar feadh 10 nóiméad. Nigh uair amháin le DMF le linn an eatraimh. Tar éis an t-imoibriú a bheith críochnaithe, tirim faoi bhfolús agus nigh trí huaire le DMF.
Céim 2:Tuaslaig 5.06g Fmoc-Pro-OH, 2.02g HOBT (1-hiodrocsaibenzotriazole), agus 2.32ml DIC (N,N'-déisopropylcarbodiimide) i DMF ag 0°C. Tar éis díscaoileadh iomlán, cuir an meascán leis an gcolún imoibrithe agus imoibríonn sé ag teocht an tseomra ar feadh 1 uair an chloig. Monatóireacht a dhéanamh ar dhul chun cinn an imoibrithe ag baint úsáide as an tástáil ninhydrin (tástáil Kaiser) go dtí go bhfaightear torthaí diúltacha. Ar chríochnú, nigh trí huaire le DMF chun Fmoc-Pro-Val-aminoresin a fháil.
Céim 3:Tar éis an modh a thuairiscítear i gCéim 2, cuir gach aimínaigéad le chéile go seicheamhach de réir seicheamh Melanotan I. Tar éis imoibriú cúplála Ac-Ser(tBu)-OH a chríochnú, nigh trí huaire le DMF, trí huaire le DCM (déchlóraimeatán), agus trí huaire le meatánól. Triomaigh faoi fholús chun 23.89g de pheiptíd lánchosanta Melanotan I a fháil atá faoi cheangal roisín.
III. Ullmhú Melanotan I Peptide Amh
Cuireadh 23.89 g de pheptíd lánchosanta Melanotan I ceangailte le roisín i bhfleascán bunchruinn. Ag 0°C, cuireadh 250 ml de mhhanglaim scoilteachta réamhullmhaithe (comhdhéanta de TFA:thioanisole:feanól:triisopropylsilane:uisce = 82.5:7.5:5:3:2 de réir toirte) go mall faoi chorraí. Imoibríodh an meascán ag teocht íseal ar feadh 0.5 uair an chloig, agus imoibriú ag teocht an tseomra ar feadh 2 uair an chloig ina dhiaidh sin. Scagadh an tuaslagán scoilteachta ansin faoi fholús. Cuireadh an tuaslagán seo go mall le 2 L d'éitear dieitile ainhidriúil fuar-oighear faoi chorraí. Rinneadh an peptide amh a leithlisiú trí scagachán, nite trí huaire le héitear dieitile fuar-oighear, agus fuarthas 8.55 g de pheptíd amh Melanotan I.
IV. Ullmhú Melanotan I Peptide íonaithe
Céim 1:Tuaslaig an peiptíd amh Melanotan I i 100 ml d'uisce íonaithe agus scag trí membrane 0.45 μm chun tuaslagán amhpheptíde a fháil.
Céim 2:Purigh an peiptíd amh Melanotan I ag baint úsáide as crómatagrafaíocht leacht ardfheidhmíochta (HPLC). Úsáid colún comhbhrú aiseach dinimiciúil DAC-HB50 le céim shoghluaiste A (tuaslagán uiscí aigéad trifluoroacetic 0.05%) agus céim soghluaiste B (aigéad trifluoroacetic 0.05% in aicéatóinitrile). Déan elution grádán le haghaidh scaradh agus íonú. Bain úsáid as brathadóir UV ar an sampla agus bailigh an tuaslagán peiptíde a fhreagraíonn don bhuaic sprice i gcodáin.
Céim 3:Tar éis íonú HPLC, faigh 180 ml de thuaslagán trifluoroacetate Melanotan I a bhfuil íonacht níos mó ná 99%. Dírigh an tuaslagán go 50 ml trí ghalú rothlach.
Céim 4:Cothromaigh an colún crómatagrafaíochta le huisce dí-ianaithe agus luchtaigh 50 ml den tuaslagán trífhluara-aicéatáit Melanotan I íonaithe (íonacht >99%). Elute ar feadh 50 nóiméad i gcóras tuaslagán uiscí aigéad aicéiteach 2%. Dírigh an sprioctháirge bailithe go 80 ml trí ghalú rothlacha. Déan triomú réamhreo agus triomú reoite chun 5.33 g de pheptíd íonaithe Melanotan I a fháil ar deireadh thiar, le toradh 32.33%.
Am postála: 2026-01-05