Forbhreathnú ar léiriú próitéine

Tagraíonn ProteinexPression don teicneolaíocht a bhaineann leis an sprioc-ghéin a atáirgeadh i veicteoir saorga agus ansin é a thabhairt isteach sa chóras cille nó saor ó chillín chun an próitéin a chur in iúl i gcóras heterologous.

Is féidir le léiriú próitéine an fhadhb a réiteach go bhfuil sé deacair próitéiní dúchasacha a fháil. Ó bunaíodh an chéad bhunaíocht ar léiriú próitéine heitreabhánach sna 1970í, tá na mílte próitéiní athchuingreach curtha in iúl go rathúil, a chuireann forbairt leanúnach na biteicneolaíochta agus an taighde bhithleighis agus an tionscail chun cinn go héifeachtach.

Cuspóir:

Trí léiriú próitéine, is féidir próitéiní a fháil atá deacair a fháil ó fhoinsí nádúrtha ar dtús.

Ar an dara dul síos, ní hamháin go n -éascaíonn an bhaisc mhór agus an íonacht ard de tháirgí léirithe próitéine an anailís ar an spriocphróitéin, ach laghdaíonn sé go mór an costas.

Níos tábhachtaí fós, is iondúil go roghnaítear na próitéiní athchuingreach chun bithshábháilteacht ard na cille óstach a léiriú, rud a sheachnaíonn roinnt rioscaí bithshábháilteachta a d'fhéadfadh a bheith ag an óstach pataigineach.

Modh:

Cuimsíonn sé go príomha próisis mhacasamhlú blúire géine, réamhrá isteach sa chóras léirithe, léiriú spreagtha, íonú táirge agus anailís.

Forbhreathnú ar léiriú próitéine

Aicmiú:

De ghnáth is féidir córais léirithe próitéine a roinnt ina:

1. Córas léirithe núicléiche: Is é Escherichia coli an córas léirithe próitéine is coitianta, a bhfuil buntáistí cúlra géinití soiléire aige, atáirgeadh áisiúil, costas íseal agus slonn ard. Mar sin féin, níl meicníocht modhnaithe aistriúcháin ann agus níl sé oiriúnach do ghliceasú nó do scoilteadh pointe roghnóireachta speisialta chun léiriú próitéine a mhodhnú. Is féidir Bacillus subtilis a úsáid freisin le haghaidh léiriú próitéine, agus is iad na buntáistí atá ann ná cumas láidir meitibileach agus gníomhaíocht ísealphróitéin, a tharraing aird de réir a chéile.

2. Córas léirithe eukaryotic: Is féidir méid áirithe glycosylation a bhaint amach tar éis an aistriúchán, atá níos gaire do ghníomhaíocht nádúrtha próitéiní eukaryotic. Tá sé san áireamh den chuid is mó. ① Córas léirithe giosta (giosta dearg coiteann, giosta grúdaireachta, etc.), is féidir le giosta a bheith mellow ard-dlúis, is féidir é a mhodhnú tar éis an aistriúcháin, tá buntáistí na gceall óstach prokaryotic agus eukaryotic, agus is córas léirithe próitéine maith é freisin. ② Córas léirithe cille feithidí: Aistrítear géinte exogenous isteach i gcealla feithidí trí veicteoir baculovirus le haghaidh léirithe. Is córas ardléirithe é do phróitéiní eukaryotic, atá oiriúnach do phróitéiní membrane, próitéiní macramóilíneacha, kinases próitéine agus próitéiní eile atá deacair a chur in iúl i gcóras prokaryotic. ③ Córas léirithe cille mamaigh: Tá éifeachtúlacht aistriúchán agus maisiú cealla mamacha i bhfad níos airde ná éifeachtúlacht na gcóras giosta agus cille feithidí. Tá struchtúr agus feidhm na gceall mamacha níos gaire do phróitéiní eukaryotic dúchasacha, ach tá an leibhéal cainte íseal agus tá an costas ard.

3. Córas léirithe saor ó chill: Is féidir próitéiní sprice a chur in iúl go díreach ó cháithníní agus ó tháirgí PCR, agus is sleachta saor ó chill ó Escherichia coli, suthanna cruithneachta, reticulocytes coinín, srl.